养殖场分离的耐氟喹诺酮类药物的大肠杆菌基因突变研究

摘要

[目的]探讨从养殖场动物、环境和饲养员分离的大肠杆菌的gyrA 和parC 基因突变特征.[方法]用琼脂稀释法测定环丙沙星和恩诺沙星对菌株的最小抑菌浓度.PCR扩增gyrA 和parC 基因的喹诺酮耐药决定区,扩增的片段长度分别为525 bp和487 bp,PCR产物直接测序.[结果]在63株突变株中,在GyrA 亚基发生的氨基酸替代有Ser83→Leu(62株)和Asp87→Asn(52株)、Asp87→Tyr(2株)、Asp87→His(2株);ParC 亚基的氨基酸替代有Ser80→Ile(47株)、Ser80→Arg(2株)和Glu84→Val(3株)、Glu84→Lys(4株)、Glu84→Gly(5株)、Glu84→Ala(1株).环丙沙星对菌株的MIC小于0.125μg·ml-1时,GyrA和ParC亚基均没有任何变异;环丙沙星的MIC为0.125～0.25 μg·ml-1时,GyrA亚基出现单一氨基酸替代;环丙沙星的MIC为0.5～32μg·ml-1时,出现GyrA 83位和87位双替代或者GyrA83和ParC80位双替代;环丙沙星的MIC为4～128μg·ml-1,发生GyrA 双替代和ParC单替代;环丙沙星的MIC在16～128μg·ml-1,发生GyrA双替代和ParC 双替代.[结论]不同来源的耐氟喹诺酮类药物的大肠杆菌GyrA和ParC具有多种氨基酸替代类型,而且GyrA和ParC突变位点的数量与菌株对氟喹诺酮类耐药水平呈正相关.