铁皮石斛蛋白提取工艺优化、活性成分筛选及结构研究

摘要

探究对提取工艺优化后筛选的铁皮石斛蛋白对损伤的大鼠胃黏膜上皮细胞的修复作用。通过单因素考察提取时间、料液比和硫酸铵饱和度对铁皮石斛水溶性总蛋白收率的影响,以铁皮石斛水溶性总蛋白收率为响应值考察最佳提取工艺。采用蛋白纯化技术,用DEAE弱阴离子交换柱层析法分离铁皮石斛水溶性总蛋白,以大鼠胃黏膜上皮细胞(GECs-1)建立损伤模型并进行活性筛选。采用紫外扫描、红外光谱及圆二色谱进行结构表征。结果显示,铁皮石斛水溶性总蛋白最佳提取工艺为:提取时间6 h,料液比1:27 g/mL,硫酸铵饱和度80%,此条件下铁皮石斛蛋白收率可达8.65%±0.13%,与预测值接近;铁皮石斛水溶性总蛋白在优化提取工艺的基础上纯化得到三种蛋白,其中,TPSHP-2(铁皮石斛蛋白-2)在280 nm处有最大吸收峰,主要为β-折叠结构,且对乙醇损伤的大鼠胃黏膜上皮细胞的修复效果最好。优化提取工艺后纯化得到的TPSHP-2对损伤的大鼠胃黏膜上皮细胞具有修复作用。