SrtA蛋白在大肠杆菌中的高效表达与活性鉴定

摘要

按大肠杆菌偏好优化密码子并合成高活性突变型srtA基因,构建Trx蛋白共表达载体pTIG-srtA,转入大肠杆菌BL21(DE3)后低温诱导表达,通过Ni2+柱亲和层析纯化SrtA蛋白,连接LHN-LPETG和G-HC蛋白检测SrtA蛋白活性.菌液PCR鉴定和测定序列比对结果显示,构建pTIG-srtA载体成功;SDS-PAGE及Western Blot分析结果显示,在大肠杆菌中实现了SrtA蛋白的可溶性高表达,Ni2+柱亲和层析后得到纯度大于95％的SrtA蛋白,LHN-LPETG和G-HC蛋白成功连接表明,原核系统表达纯化的SrtA蛋白具有良好的转肽酶活性.