动力学法优化碱性果胶酶比活的测定方法

摘要

本文通过优化蛋白浓度测定方法和酶活力测定方法,并以酶解动力学曲线考察方法优化的合理性,以验证终点法测定碱性果胶酶比活的准确性.结果 表明,果胶酶蛋白的最佳测定波长为550 nm,其线性和截距明显优于传统方法,可以忽略果胶酶稀释倍数对蛋白测定的影响.钙离子对该酶具有激活作用;聚半乳糖醛酸比果胶更适合作为酶活力测定底物,其最适pH为9.5,最佳浓度为2 mg/mL,果胶酶活力测定的最佳波长为232 nm,所测酶活力在吸光度值0～2范围内均保持零级反应状态,酶蛋白浓度与酶解速率线性相关且回归曲线截距更接近原点,因此,该测定条件不仅可用于终点法,酶解时间也可灵活掌握,而非拘泥于一个固定的时间段.以酶解30 min为例,其检测限(LOD)为0.15 mU/mL.由于DNS法的灵敏度较低,其半乳糖醛酸标准曲线不过原点,从而导致因酶液稀释倍数不同而产生测量误差,因此,紫外法测定碱性果胶酶活力为最佳选择.