抗赭曲霉毒素A五价纳米抗体的表达及分析

摘要

利用霍乱毒素B亚基(B subunit of Cholera toxin,CTB)能自组装形成五元环状结构,将霍乱毒素B亚基与纳米抗体(VHH28)进行融合从而达到纳米抗体多聚化的目的.将重组载体pET25b(+)-CTB-VHH28转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,对诱导剂浓度、诱导温度、诱导时间进行优化,SDS-PAGE凝胶电泳分析融合蛋白表达情况.结果显示CTB-VHH28为可溶表达,其中单体分子量大小约30 kDa,五聚体分子量大小约150 kDa,均与预测的分子量大小一致;确定了其最优表达条件为:IPTG浓度为0.05 mmol/L,诱导温度为16℃,诱导时间为10 h.经过镍柱纯化后成功得到了纯度较高的五价纳米抗体,表达量为20 mg/L.对其活性进行测定,结果表明CTB-VHH28能与赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)特异性结合,在2.5％甲醇条件下,间接竞争ELISA半抑制浓度(IC50)为0.38 ng/mL.热稳定性及甲醇耐受性结果显示,CTB-VHH28在25～55℃具有良好的热稳定性,反应体系中甲醇浓度低于20％时,竞争抑制率变化不大,具有较好的甲醇耐受性.结论:本研究所制备的五价纳米抗体可以用于OTA检测.