抗转铁蛋白受体双价抗体的构建、表达及鉴定

摘要

目的:抗转铁蛋白受体(TfR)双价抗体(bsFv)构建、表达及其与细胞结合的活性鉴定.方法:以抗TfR的单链抗体(scFv)为模板,设计引物引入中间连接肽(G4s)及酶切位点AscI,通过PCR方法扩增两条scFv片段,将其连接并克隆至原核表达载体pAB1,转化大肠杆菌TG1,阳性菌经IPTG诱导表达,FCM检测bsFv与K562,HepG2肿瘤细胞结合的活性及特异性.结果:酶切鉴定及DNA测序证明该bsFv构建成功;SDS-PAGE、Western blot鉴定表明表达蛋白分子量与bsFv理论值一致;FCM结果证明bsFv可与K562,HepG2肿瘤细胞特异性结合,且结合的阳性率较scFv有所提高.结论:成功构建了抗转TfR的bsFv,且能与K562,HepG2肿瘤细胞特异性结合.