人整合素β3亚基毕赤酵母表达载体的构建及鉴定

摘要

目前研究表明整合素β3亚基是多种病毒的细胞表面受体,然而整合素β3亚基与不同病毒受体结合蛋白VAP相互作用的分子机制还不完全清楚.为此,设计引物,采用RT-PCR方法扩增人β3亚基包膜外区约2.1kb片段,克隆入毕赤酵母表达载体pPIC3.5K中.双酶切鉴定挑取阳性克隆pPIC3.5K-β3,测序证实目的基因序列正确.将pPIC3.5K-β3转化毕赤酵母工程菌GS115,在浓度为3.0 mg/mL的G418选择培养基上,筛选出含有多拷贝目的基因的阳性菌株,PCR可扩增出约2.1 kb的目的条带.阳性菌株经1%甲醇诱导表达,Western-blot可在酵母菌体中检测到约80 kDa的目的蛋白条带.上述结果表明,成功构建了人整合素β3亚基毕赤酵母表达载体,筛选获得多拷贝阳性菌株并成功表达,为进一步研究人整合素β3在病毒感染中的作用及其单克隆抗体的制备奠定基础.