p42/p44 MAPK信号转导通路在缺氧诱导的人视网膜色素上皮细胞VEGF表达中的作用

摘要

目的探讨p42/p44丝裂原活化蛋白激酶 (mitogen-actived protein kinase,MAPK)信号转导通路对缺氧诱导的人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞VEGF表达中的作用.方法利用CoCl2建立培养的人RPE细胞缺氧模型,用20 μmol*L-1 p42/p44 MAPK特异性阻断剂PD98059处理RPE细胞,在缺氧条件下分别培养0 min、5 min、10 min、30 min、60 min和120 min,用Western blot方法检测磷酸化p42/p44 MAPK表达;培养人RPE细胞1 h、3 h、6 h、12 h和24 h,用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbant assay,ELISA)检测缺氧条件下RPE细胞上清中VEGF的含量.结果缺氧刺激5 min、10 min、30 min、60 min和120 min时,磷酸化p42/p44 MAPK水平逐渐增高;相应PD98059处理组磷酸化p42/p44 MAPK水平降低,只可见磷酸化p42 MAPK条带.在缺氧1 h、3 h、6 h、12 h和24 h时,RPE细胞上清液中VEGF含量随时间逐渐增加(P<0.01),PD98059处理组VEGF含量较对照组显著减少(P<0.01).结论 p42/p44 MAPK信号转导通路可能参与了缺氧引起的人RPE细胞VEGF的表达.