rAAV载体介导基因对糖尿病大鼠视网膜转染的实验研究

摘要

目的 以重组腺相关病毒载体(recombinant adeno-associated virus,rAAV)携带色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)和绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因转染入糖尿病大鼠视网膜,观察其定位及表达情况.方法 Wistar大鼠分为正常组(CON)及实验组.实验组以链脲佐菌素诱导形成糖尿病模型后,随机分为1个月组(DM1)、3个月组(DM3)和6个月组(DM6).右眼玻璃体腔内注射2 μL rAAV2-CMV-hPEDF,左眼注射等量rAAV2-CMV-GFP.CON组右眼注射2 μL生理盐水.用荧光显微镜观察GFP表达部位,用RT-PCR测定PEDF的表达情况.结果 荧光显微镜显示,DM1组视网膜全层,主要是节细胞层表达强荧光.DM3组全层视网膜和部分巩膜表达强荧光.DM6组视网膜及巩膜全层表达强荧光,荧光强度、范围与DM3组相比明显增加.RT-PCR显示,人PEDF mRNA在CON、GFP注射眼组大鼠视网膜均无表达.在右眼实验组1个月时可见hPEDF mRNA表达,并随时间延长,表达不断增强,持续到6个月.结论 AAV载体可将PEDF及GFP基因有效地转染入糖尿病大鼠视网膜内并长期表达超过6个月.