犬细小病毒VP2基因序列分析及BJ-1株的分离鉴定

摘要

为分离犬细小病毒毒株,对临床经胶体金试纸条检测CPV阳性的8份犬粪便样品进行VP2全长编码片段扩增与测序.VP2片段序列分析结果显示,8株临床样品的VP2基因全长均为1755 bp,氨基酸的同源性为98.5％～100％.遗传进化分析显示,所有分离的毒株均与所参考的中国分离株在一个分支上.其中1株属于New CPV-2b,其余7株均为New CPV-2a.在序列分析基础上,选择北京地区的1份犬粪便样品,接种F81细胞进行病毒分离.粪便样品接种F81细胞盲传5代后出现典型的病变.对该毒株进行电镜观察、免疫荧光试验以及蛋白电泳鉴定.电镜观察显示病毒粒子的外形结构为圆形或六边形,直径约25 nm,可见实心和空心病毒粒子.间接免疫荧光结果显示,接种病毒液的细胞出现特异性亮绿色荧光信号,对照细胞无荧光信号.纯化后的病毒蛋白电泳显示两条清晰的条带分别为VP1(76 ku)、VP2(64 ku).结果表明,成功分离到1株New CPV-2a亚型毒株,并将其命名为CPV BJ-1株.