结核分支杆菌MPT83在真核、原核表达载体中的克隆、表达与鉴定

摘要

为了克隆、鉴定和表达结核分支杆菌抗原蛋白MPT83,为结核病的诊断以及亚单位疫苗、核酸疫苗的制备和应用奠定基础.以结核分支杆菌标准菌株H37RV基因组DNA为模板,PCR扩增目的基因mpt83,扩增产物酶切后分别克隆到真核、原核表达载体pJW4303和pET22b(+)中,构成重组真、原核表达载体83 eu和MPT83.经酶切和序列鉴定为正确的重组真核表达载体83 eu和重组原核表达载体MPT83,分别转染COS7细胞和转化BL21(DE3)plysS.结果表明,经SDS-PAGE、Western blotting 检测显示,IPTG诱导的原核表达载体MPT83在2.6万处有正确而特异的蛋白条带;转染COS7细胞的真核表达载体83 eu,Western blotting检测表明也有与结核分支杆菌抗血清特异反应的蛋白条带.