pEGFP-hTERT真核表达载体的构建及转染牛乳腺细胞方法的优化

摘要

针对牛乳腺细胞体外培养存活周期短、转染效率低等特点,分别采用Ⅰ型、Ⅱ型胶原酶消化培养法及组织贴壁培养法,比较了牛乳腺细胞的生长、迁移、分化和凋亡等一系列特征.同时构建了携带绿色荧光蛋白报告基因的端粒酶融合表达载体pEGFP-hTERT,采用脂质体分别转染两种真核表达载体pEGFP-hTERT、pEGFP-C1,通过比较载体不同浓度、传代细胞转染适合密度及生长活力、转染后的荧光强度等检测转染效率.结果表明,第3代细胞接种密度大约70%,浓度为350 ng/μL的载体适合于牛乳腺细胞的转染,转染效率大约为25%.试验结果为牛乳腺细胞体外转基因研究奠定了技术基础.