鸡Mx基因的原核表达及表达蛋白抗病毒活性初步研究

摘要

将鸡Mx基因克隆入pET一32a载体,筛选鉴定后将重组阳性质粒转化到大肠埃希菌株BL21进行诱导表达,表达产物用west,ern blot鉴定,并经镍亲和层析法纯化及透析复性,得到的蛋白用微量细胞病变抑制法检测其抗病毒活性.结果显示,构建的载体经PCR扩增得到长度为2 118 bp的特异片段,测序结果证实与鸡Mx基因同源性99.95%,western blot结果显示在78 ku处检测到特异性蛋白条带,微量细胞病变抑制试验结果显示,表达产物经8倍和256倍稀释后可分别保护50 %鸡胚成纤维细胞免受新城疫病毒(NDV)和水疱性口炎病毒(VSV)的感染.结果表明,成功表达了鸡Mx蛋白,且表达产物具有一定的抗DNV和VSV活性.