咖啡因间歇刺激抑制环孢素A诱导的L6肌管细胞毒性研究

摘要

为观察咖啡因间歇刺激是否减轻环孢素A所致的细胞毒性及对骨骼肌细胞的泛素-蛋白酶体途径和钙蛋白酶活性的影响,将分化的L6肌管细胞分为4组,即对照组、咖啡因组、环孢素A组和咖啡因十环孢素A组.咖啡因(5 mmol/L)和环孢素A(10μmol/L)每天刺激5h,连续刺激5d,然后收集细胞.荧光实时定量PCR检测FoxO1、MAFbx、MuRF1基因表达；Western blot法检测FoxO1、MAFbx、MuRFI和20S蛋白含量；荧光定量法检测20 S蛋白酶和钙蛋白醇的体外活性.结果表明,加环孢素A的两组细胞大小明显小于另外两组,且咖啡因间歇刺激可以减轻环孢素A诱导的肌管细胞萎缩；间歇刺激下,加咖啡因的两组FoxO1mRNA表达下调；MuRF1和MAFbx两个基因的表达在各组之间无差异,且咖啡因和环孢素A对FoxO1/MuRF1/MAFbx和20 S蛋白酶体蛋白含量皆无主效应.荧光定量检测蛋白酶活性结果显示,咖啡因和环孢素A不影响20 S蛋白酶体的活性,但对钙蛋白酶体外活性有交互影响.环孢素组钙蛋白酶体外活性低于正常组；环孢素A+咖啡因组低于咖啡因组,但高于环孢素组.说明咖啡因间歇刺激可减轻环孢素A所致的肌管萎缩,且咖啡因间歇刺激改可善环孢素A抑制的钙蛋白酶体外活性.