猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒和猪博卡病毒多重PCR检测方法的建立

摘要

根据GenBank登录的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因序列、猪流行性腹泻病毒(PEDV)M基因和猪博卡病毒(PBoV) NP1基因序列,设计合成3对引物.通过优化反应条件,对TGEV、PEDV RNA反转录获得的cDNA模板和PBoV的DNA模板进行多重PCR扩增,同时得到3条与试验设计相符的1 060 bp(TGEV)、462 bp(PEDV)及258 bp(PBoV)特异性条带,建立了同时检测TGEV、PEDV和PBoV的多重PCR方法.结果表明,在同一PCR反应体系中,可以同时检测这3种病毒核酸片段,而对其他病毒的检测均为阴性；敏感性分析表明,该方法的最低检测限分别为35、20、10 pg的核酸.采用该方法对60份临床样品进行检测,TEGV阳性率为1.6％,PEDV阳性率为6.7％,PBoV阳性率为21.7％,表明建立的方法可以应用于临床检测.