柯萨奇病毒A组16型衣壳蛋白VP1的原核表达

摘要

构建柯萨奇病毒A组16型(CVA16)衣壳蛋白VP1重组质粒pET-41a(+)/VP1,优化诱导表达条件,进行原核表达及蛋白纯化.通过PCR扩增获得VP1基因片段并转进大肠埃希菌E.coli BL21(DE3)内进行表达.从时间、温度、诱导剂浓度三个方面优化表达条件,收集表达菌体,经镍柱和DEAE柱纯化后,用蛋白印迹检测免疫反应性.结果表明,目的蛋白为包涵体,分子质量约为61 ku,与设计蛋白分子质量大小相符,以诱导5h、IPTG的浓度为0.20 mmoL/L、温度为37℃时蛋白表达量最高.纯化后蛋白纯度达到94％,蛋白印迹检测具有免疫反应性.试验成功获取了柯萨奇病毒A组16型(CVA16) VP1蛋白,且该蛋白具有免疫反应性.