黄芪甲苷对马兜铃酸诱导的巨噬细胞M1型极化的作用及机制研究

摘要

目的:探讨黄芪甲苷对马兜铃酸诱导的RAW264.7细胞向M1型极化的影响,并初步探索其可能的作用机制.方法:分别采用马兜铃酸和脂多糖(LPS)刺激RAW264.7细胞24h,伴或不伴黄芪甲苷进行药物干预处理.采用细胞计数检测试剂盒-8(CCK8)检测细胞活性变化,流式细胞仪检测巨噬细胞分型,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清液中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的分泌量.反转录实时定量PCR(RT-qPCR)技术检测RAW264.7细胞IL-6、TNF-α mRNA表达.蛋白免疫印迹法(Western blot)检测RAW264.7细胞p-p38和p38 MAPK蛋白表达水平.结果:CCK8结果提示黄芪甲苷在5～50 μg/mL浓度范围对RAW264.7巨噬细胞无明显毒性,本研究选取10μg/mL作为实验干预浓度.黄芪甲苷能够显著改善马兜铃酸诱导的巨噬细胞活性(P＜0.05),同时减少Ⅱ-6和TNF-α的分泌水平和mRNA表达水平(均P＜0.05),抑制马兜铃酸和LPS诱导的M1/M2巨噬细胞比例(P＜0.05).黄芪甲苷可部分抑制马兜铃酸诱导的巨噬细胞p38 MAPK磷酸化水平(P＜0.05).结论:黄芪甲苷可减少巨噬细胞M1型极化,降低炎症因子IL-6和TNF-α水平,减少巨噬细胞的活性,从而起到减缓马兜铃酸肾损害的作用,其作用机制可能与部分抑制p38 MAPK信号活性有关.