小干扰RNA靶向EGFR基因逆转卵巢癌细胞顺铂耐药的研究

摘要

目的:探讨载体表达的小干扰RNA(siRNA)影响卵巢癌耐药细胞株EGFR基因的表达并逆转其顺铂耐药的可行性.方法:体外构建EGFR小发卡状RNA(shRNA)的表达质粒,脂质体法介导将其转染入SKOV3/DDP细胞.实验分为正常对照组、空质粒转染组、非特异性转染组和特异性转染组.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测EGFRmRNA的表达;使用免疫细胞化学法(ICC)检测EGFR蛋白的表达;使用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)测定各组细胞对顺铂的半数抑制浓度(IC50).结果:EGFR shRNA转染组细胞EGFRmRNA的表达与其他两组相比明显减弱(P<0.01),EGFR蛋白表达明显下调(P<0.01);顺铂敏感性比正常对照组提高了约2.5倍.结论:针对EGFR合成的siRNA能够有效地抑制EGFRmRNA和蛋白的表达,并能恢复其对顺铂的敏感性.应用RNAi技术,能够逆转卵巢癌细胞对化疗药物的耐药性.