重组尿激酶原的纯化和性质研究

摘要

ＣＨＯ工程细胞１１Ｇ持续表达的ｐｒｏ－ＵＫ分泌在细胞培养液的上清中，培养液上清经过微孔玻璃（ＭＰＧ）吸附色谱，羧甲基阳离子交换色谱，高压液相凝胶色谱三步纯化，纯化倍数可达７００倍以上，总回收率为４６％．再经过Ｂｅｎｚａｍｉｄｉｎｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ６Ｂ亲和层析去掉少量的双链尿激酶，得到纯化尿激酶原．终产物经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ银染分析，纯度达９０％以上，分子量为５２ｋｕ，其比活性为５１２２０Ｕ／ｍｇ．抗体中和、二异丙基氟磷酸（ＤＦＰ）抑制等实验证明重组ｐｒｏ－ＵＫ的性质和天然ｐｒｏ－ＵＫ的性质相一致．