来源于P.bacterium 1109的甘露醇脱氢酶的重组纯化及酶学性质研究

摘要

本文将来自P.bacterium 1109的甘露糖醇脱氢酶(MDH)表达并提取纯化,研究了该重组酶的酶学性质及其在甘露醇生产中的工艺条件.结果 显示重组MDH是一个相对分子量为37 kDa的四聚体.氨基酸序列比对发现其与大多数MDHs的同源性小于40％.该酶的最适pH和温度分别为8.5和80℃,且当金属离子Zn2存在时,重组MDH的活力提高到对照组的260％.此外,重组MDH在75℃孵育6h后仍可保留超过85％的残留活性,热稳定性较高,比大多数MDHs的活性高.底物特异性研究表明其对D-果糖具有较高的专一性.重组MDH催化D-果糖的米氏常数(Km)和催化效率(kcat/Km)分别为20 mmol/L和7.5 L/(mmol· min).重组MDH在以400 mmol/L的D-果糖为底物的反应系统中,可将80％以上的D-果糖转化为甘露糖醇.通过对反应条件的优化,为后续工业化生产制备甘露醇奠定了基础.