miR-17-5 p和MMP2在百草枯致肺上皮-间质转化中的机制研究

摘要

目的 揭示miR-17-5p和MMP2在百草枯(Paraquat,PQ)中毒所致的肺上皮-间质转化(Epithe-lial-mesenchymal transition,EMT)中的作用.方法 构建PQ中毒致肺EMT的细胞模型(A549细胞),经15、30、60μmol/L的PQ染毒6 d,采用Western blot或qRT-PCR检测模型中EMT相关基因E-钙黏附蛋白(Epithelia cad-herin,E-cadherin)和α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达情况.采用Western blot或qRT-PCR检测模型中基质金属蛋白酶2(Matrix metalloproteinase 2,MMP2)、miR-17-5p的表达情况,通过转染miR-17-5p的类似物(mimic)或抑制剂(inhibitor)来研究miR-17-5p对MMP2的调控作用.结果 Western blot结果显示,E-cadherin在30μmol/L PQ染毒组表达下调(P=0.018),在60μmol/L PQ染毒组下调更明显(P=0.009);α-SMA在30μmol/L PQ染毒组 α-SMA表达上调(P=0.037),在60μmol/L PQ染毒组上调更明显(P=0.008);MMP2在30μmol/L PQ染毒组MMP2表达上调(P=0.016),在60μmol/L PQ染毒组上调更明显(P=0.007).qRT-PCR结果显示,E-cadherin在30μmol/L PQ染毒组表达下调(P=0.010),在60μmol/L PQ染毒组下调更明显(P<0.001);α-SMA在30μmol/L PQ染毒组表达上调(P=0.003),在60μmol/L PQ染毒组上调更明显(P<0.001);MMP2在30μmol/L PQ染毒组表达上调(P=0.004),在60μmol/L PQ染毒组上调更明显(P=0.002).qRT-PCR结果提示,30μmol/L PQ染毒组miR-17-5p表达下调(P=0.010),60μmol/L PQ染毒组miR-17-5p表达下调更明显(P=0.001).mimic作用后MMP2表达下调(P=0.002),而inhibitor作用后MMP2表达上调(P=0.005).结论 MMP2可作为miR-17-5p靶基因,其表达受miR-17-5p调控,其相互作用参与PQ致肺EMT的过程中.