Snail介导的肺上皮间质转化在肌成纤维细胞活化中的作用

摘要

cqvip:目的探讨核转录因子Snail介导的肺上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)在肌成纤维细胞活化中的作用。方法培养小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞(MLE-12)并利用转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)刺激获得EMT模型,应用RT-qPCR检测上皮标志物E钙粘蛋白(E-cadherin,CDH1)、间质标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、核转录因子Snail mRNA表达变化。建立MLE-12与小鼠胚肺成纤维细胞(NIH-3T3)共培养体系,应用RT-qPCR检测NIH-3T3的α-SMA、Ⅰ型胶原(collagenⅠα1,COL1A1)、Ⅲ型胶原(collagenⅢα1,COL3A1)mRNA表达。利用Snail-shRNA转染MLE-12,应用RT-qPCR、Western blotting检测Snail mRNA和蛋白质表达。建立慢病毒转染的MLE-12与NIH-3T3共培养体系,应用RT-qPCR检测NIH-3T3的α-SMA、COL1A1、COL3A1 mRNA表达。采用单因素方差分析及最小显著差法判断结果差异是否具有统计学意义。结果加入TGF-β1刺激48 h后,RT-qPCR结果显示,与对照组相比,TGF-β1组的CDH1 mRNA的表达下调、α-SMA和Snail mRNA的表达上调(P<0.05);共培养体系中,RT-qPCR结果显示,与TGF-β1和MLE-12组相比,加入TGF-β1刺激的MLE-12引起下室NIH-3T3的α-SMA、COL1A1、COL3A1 mRNA表达上调,且上调程度高于TGF-β1和MLE-12的单独作用(P<0.05);慢病毒转染后,与阴性对照病毒组相比,Snail慢病毒干扰组Snail的mRNA和蛋白质表达均明显下调(P<0.05);分别用阴性对照病毒和Snail慢病毒转染MLE-12后与NIH-3T3建立共培养体系,RT-qPCR结果显示,与TGF-β1+阴性对照病毒组相比,TGF-β1+Snail慢病毒转染组下室NIH-3T3的α-SMA、COL1A1、COL3A1 mRNA表达上调程度降低(P<0.05)。结论Snail介导的小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞发生EMT可引起肌成纤维细胞活化,敲减Ⅱ型肺泡上皮细胞的Snail基因可抑制成纤维细胞活化为肌成纤维细胞。提示Snail介导的肺上皮间质转化在肌成纤维细胞活化中发挥重要作用。