采用定点整合表达技术构建t-PA表达CHO工程细胞株

摘要

运用Flp InTM 定点整合表达系统构建表达组织型纤溶酶原激活剂 (tissue type plasminogenactivator ,t PA)的CHO工程细胞株。将pcDNA5 /FRT载体和携带t PA基因的 pJOD S载体用Hind/KpnI双酶切 ,再将回收的 2 .0kbt PAcDNA片段和pcDNA5 /FRT载体连接 ,构建 pcDNA5 /FRT/t PA质粒 ;应用Flp InTM定点整合表达系统 ,将t PAcDNA定点插入Flp lnTM CHO细胞基因组中的 1个单拷贝位点上 ,以潮霉素B筛选定点整合t PAcDNA的细胞克隆。经筛选和体外纤维蛋白溶解活性检测 ,获得了t PA表达水平为 15 0 0～ 2 0 0 0IU/ (10 6cells·day)的CHO工程细胞株。