BMP4基因真核表达质粒的构建及其在CHO细胞中的表达

摘要

为克隆人BMP4基因,构建真核表达质粒,并在CHO细胞中表达,用以进行骨修复的基因治疗,用RT-PCR法,从人的松质骨中扩增BMP4的cDNA,插入pGEM-TEASY载体,测序证实后,将其亚克隆至质粒PCDNA3.1B(-)中构建BMP4真核表达载体;用脂质体将重组质粒转染CHO细胞,经G418筛选获得抗性细胞克隆,用RT-PCR和免疫化学方法鉴定转染细胞中BMP4基因的表达.结果表明:经限制性内切酶酶切图谱分析和DNA序列测定证实目的基因已插入重组质粒,RT-PCR和免疫化学方法证明转基因CHO细胞克隆中存在人BMP4基因.