ctxB和ureB抗原表位的融合表达及其免疫学活性

摘要

为研制新型有效的幽门螺杆菌疫苗,设计了一个由ctxB(去除信号肽部分)和ureB抗原表位融合的新型分子。PCR扩增霍乱弧菌的ctxB基因,插入到质粒pET32a上,再将化学合成的ureB抗原表位序列(编码的氨基酸为CHHLDKSIKEDVQFADSRI)连接到ctxB下游,融合基因命名为ctube。将含有融合基因的pET32a转化到大肠杆菌BL21(DE3),诱导表达后SDS-PAGE测定融合蛋白ctube的分子质量,ELISA法检测ctube对神经节苷脂GM1的结合活性,Western blotting检测对兔抗幽门螺杆菌(Hp)多抗的结合活性。序列分析结果表明,ctube基因全长387bp,编码129个氨基酸,其中ctxB的密码子与GenBank上的序列同源性达到99％。转化后的大肠杆菌BL21(DE3)经IPTG诱导表达后,产生了一个分子质量为2.5万的蛋白,经肠激酶酶切后的产物为ctube。ELISA试验和West Blotting表明,ctube与神经节苷脂性GM1、兔抗Hp多抗均具有很好的结合活性,有希望成为一个具有抗幽门螺杆菌感染的新的活性分子。