猪轮状病毒OSU强毒株vp7基因的克隆及其抗原表位原核表达和免疫学活性分析

摘要

参照GenBank中所收录的猪轮状病毒OSU株序列设计了一对特异性引物，RT-PCR扩增出1062bp的vp7全长基因，与参考OSU序列的核苷酸同源性达99.8%，克隆到pMD18-T载体中，获得pMD18-T-VP7阳性质粒。以阳性质粒为模板，利用引入BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点的表达引物进行PCR扩增得到含有VP7中和抗原表位区域639bp的基因片段，定向克隆到表达载体pGEX-6P-1中，经酶切PCR鉴定的阳性质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)，经IPTG(终浓度为1.0mmol/mL)37℃诱导4h后，SDS-PAGE电泳显示表达了大小约50ku带GST标签的融合蛋白，薄层扫描显示表达蛋白量占菌体总蛋白的33.2%。Western blot分析表明该VP7重组蛋白可与PRV阳性血清特异性反应。