利用鱼抗血清及鼠抗血清分析鱼肠道弧菌全菌蛋白抗原性

摘要

从患腹水症牙鲆脾脏组织中分离得到一株优势菌株CD86,经人工感染实验证实菌株CD86对牙鲆有较高的致病力,其半致死浓度为1.8×105 CFU/尾.通过生理生化特征测定和16S rDNA基因序列分析,判定菌株CD86为鱼肠道弧菌(Vibrio ichthyoenteri).以福尔马林灭活的菌株CD86全菌分别免疫健康的小鼠和牙鲆,ELISA测定鼠抗血清和牙鲆抗血清效价分别为12 800和1 200.利用间接免疫荧光技术检测2种抗血清与菌株CD86的结合活性,结果显示,2种血清均可同菌体发生阳性反应,其中鼠抗血清阳性反应信号明显强于鱼抗血清.同时,利用Western blotting分析了菌株CD86全菌蛋白的抗原性,结果显示分子量为27、30和37 kDa的菌体蛋白条带与2种血清均发生阳性反应;分子量为19、25、28、29和35 kDa的菌体蛋白条带仅与鼠抗血清发生阳性反应;分子量为45 kDa的菌体蛋白条带只与鱼抗血清发生阳性反应.研究结果表明,牙鲆对菌体抗原产生的抗体应答与小鼠存在明显差异,该发现对研筛鱼用高效的鱼肠道弧菌亚单位疫苗具有重要的参考价值.