羽衣甘蓝SRAP体系建立与优化

摘要

以羽衣甘蓝基因组DNA为模板,对相关序列扩增多态性聚合酶链式反应(SRAP-PCR)体系的各影响因子进行了单因素梯度设置,并优化了反应程序,筛选和建立了可扩增多态性高、重复性好、带型清晰的最佳SRAP反应体系和程序.结果表明:羽衣甘蓝最佳SRAP-PCR反应体系总体积10μL,包含DNA模板50 ng,1×buffer,dNTPs 0.20 mmol/L,Taq酶1U,引物各0.60 μmol/L.羽衣甘蓝最佳SRAP-PCR反应程序为94℃预变性5min,94℃变性30 s,35℃退火30 s,72℃延伸30 s,5个循环;94℃变性30 s,50℃退火30 s,72℃延伸30 s,35个循环;72℃终延伸7 min,4℃保存.经22个羽衣甘蓝F2群体单株对上述优化的反应体系和程序进行验证,均获得了多态性丰富、条带清晰的扩增图谱,表明该程序和体系能很好地满足羽衣甘蓝基因组SRAP扩增要求.