基于广泛靶向代谢组学技术与高通量测序技术探究广陈皮陈化机制

摘要

采用广泛靶向代谢组学技术与高通量测序技术探究广陈皮共存微生物对次生代谢产物的影响规律,为广陈皮的陈化机制提供科学依据。运用Waters ACQUITY UPLC HSS T3 C_(18)色谱柱(1.8μm,2.1 mm×100 mm),流动相0.04%乙酸水溶液-乙腈梯度洗脱,流速0.4 mL/min,选择电喷雾离子源在正、负离子模式下进行采集检测;采用CTAB法对口腔拭子样品进行DNA提取,建库试剂盒进行文库构建,构建好的文库经Qubit和Q-PCR定量,使用HiSeq 2500 PE250进行上机测序;对代谢组检测出的差异代谢物和高通量测序比对出的差异微生物进行相关性分析。结果表明共鉴定出386种次生代谢产物,包括酚酸类79种,黄酮类143种,蒽醌类4种,木脂素与香豆素17种,鞣质3种,生物碱47种,萜类6种,其他类87种。主成分分析(PCA)与热图分析(Heatmap)结果表明贮藏1年与贮藏3年样品次生代谢物含量存在明显差异,可明显区分,共筛选出79种差异代谢物;高通量测序基因序列与微生物参考数据库进行比对可得到共58个属,贮藏1年与贮藏3年样品微生物菌落结构相似,但相对丰度与优势菌属不同。差异代谢物与差异微生物关联分析表明,青霉属、曲霉属、耐干霉菌等优势真菌可显著影响广陈皮中黄酮类成分以及有香味化合物含量。广陈皮在陈化过程中优势微生物菌落结构的改变导致药材活性成分以及香气成分含量的变化可能是其陈化机制之一。