红霉素对过氧化氢刺激的支气管上皮细胞表达白介素-8与谷胱甘肽的影响

摘要

目的探讨红霉素对过氧化氢(H2O2)诱导的支气管上皮细胞(16-HBE)表达炎症介质白介素-8(IL-8)及抗氧化剂谷胱甘肽(GSH)的影响和可能的作用机制.方法应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察过氧化氢及红霉素对细胞生长的影响.将传代后的细胞按24、36、48 h 3个时间段分组,每个组再分为对照组、H2O2组、红霉素+H2O2组.通过酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞上清中IL-8的浓度;通过凝胶迁移率阻滞实验(EMSA)来检测转录因子核因子-κB (NF-κB)和激活蛋白-1(AP-1)的活性;通过酶联免疫检测仪检测细胞内GSH、谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)的含量;应用免疫印迹实验(Western印迹)检测谷氨酰半胱氨酸合成酶重链亚单位(γ-GCS-HS)蛋白表达.结果红霉素(5 μg/ml)预孵育36、48 h后可以抑制H2O2(0.01 mmol/L)诱导的HBE上清中IL-8的含量;红霉素(5 μg/ml)预孵育36、48 h后可以下调H2O2(0.01 mmol/L)诱导的支气管上皮细胞转录因子NF-kB、AP-1的活性;红霉素(5 μg/ml)预孵育48 h抑制H2O2(0.01 mmol/L)诱导的HBE细胞GSH和γ-GCS的含量(3.46±0.41)以及γ-GCS-HS蛋白表达、γ-GCS-HS 启动子区域AP-1转录活性.结论红霉素通过下调NF-κB、AP-1的活性而抑制H2O2诱导的炎症介质IL-8的释放,进而影响GSH及γ-GCS的合成调控.