小干扰RNA沉默组织因子基因对肝癌侵袭转移能力的影响

摘要

目的应用RNA干扰（RNAi）技术抑制人类肝癌细胞内组织因子（TF）基因表达,从而探讨对其侵袭转移能力的影响。方法本实验以人类肝癌细胞系HepG2细胞株为实验对象,将携带有针对TF小干扰RNA（siRNA）序列的质粒pGPU6/GFP/Neo-TF siRNA,转染HepG2细胞株,以适当浓度的G418筛选获得阳性克隆,通过RT-PCR和蛋白质印迹法比较转染TF siRNA（+）质粒、转染TF siRNA（-）质粒以及未转染任何质粒的HepG2细胞内源性TF在基因及蛋白质表达水平的差异,进而应用Transwell体外侵袭实验检测三者的侵袭转移能力,探讨TF对肿瘤细胞侵袭转移能力的影响。结果 （1）RT-PCR结果显示,转染TF siRNA（+）质粒的HepG2细胞其内源性TF表达水平低于转染TF siRNA（-）质粒和未转染质粒的表达水平。（2）蛋白质Western印迹法结果显示,转染TFsiRNA（+）质粒的HepG2细胞其内源性TF蛋白表达水平低于转染TF siRNA（-）质粒和未转染质粒的表达水平。（3）Transwell体外侵袭实验结果显示,转染TF siRNA（+）质粒的HepG2穿膜细胞数[（14±10）个]少于转染TF siRNA（-）质粒的HepG2穿膜细胞数[（128±18）个],经t检验比较,两组差异有统计学意义（P＜0.05）。这提示应用RNA干扰技术抑制肿瘤细胞TF表达可以使HepG2细胞侵袭转移能力显著下降。结论 TF与肝癌细胞的侵袭转移能力密切相关,应用RNA干扰技术抑制其表达可以明显降低细胞HepG2体外侵袭转移能力。