BRAFV600E突变基因沉默对甲状腺乳头状癌细胞增殖、侵袭、转移能力的影响

摘要

目的:通过慢病毒介导的RNA干扰技术使甲状腺乳头状癌细胞中BRAFV600E突变基因沉默，研究其在甲状腺乳头状癌增殖、侵袭和转移中的作用。rn 方法:将构建并鉴定好的慢病毒shRNA质粒载体转人甲状腺乳头状癌CGTHW3细胞株中，并用含6418的培养液筛选阳性克隆，应用半定量RT-PCR和Westernblot检测shRNA对BRAFV600E突变基因的抑制作用，采用四甲基偶氮哩蓝(MTT)法测定甲状腺乳头状癌细胞敲除BRAFV600E突变基因后体外增殖能力变化，采用流式细胞术测定细胞生长周期分布，采用Transwell侵袭小室检测细胞侵袭能力改变，采用细胞同质粘附实验检测细胞勃附力变化。rn 结果:①特异性干扰RNA可成功抑制甲状腺乳头状癌BRAFV 600E突变基因的mRNA和蛋白表达，使其蛋白表达量减少76% ,②MTT法结果显示，转染后24h转染组与对照组A值无显著性差异(P>0.05);转染后48h,72h转染组与对照组A值存在显著性差异(P<0.05)，其增殖抑制率分别为24%、39%.③转染组GO/G1期细胞数量较对照组增多，S期细胞数量减少。④转染组同质勃附作用高于对照组(P<0.05)。⑤侵袭实验结果显示，转染组的穿膜细胞数为242.712.8，显著低于对照组的408.113.2，差异有统计学意义(P<0.05)。rn 结论:慢病毒可成功介导特异性shRNA转染甲状腺乳头状癌细胞，并有效使BRAFV600E突变基因表达下调。BRAFV600E突变基因沉默对甲状腺乳头状癌细胞体外增殖能力具有抑制作用，并能将甲状腺乳头状癌CGTHW3细胞生长周期阻滞于GO/G1期，提示:BRAFV600E突变基因沉默可能通过阻滞甲状腺乳头状癌CGTH W3细胞生长周期从而抑制癌细胞增殖。BRAFV600E突变基因沉默后甲状腺乳头状癌CGTHW3细胞侵袭力受到一定的抑制，且细胞同质赫附力增强，提示:BRAFV600E突变基因沉默能够抑制甲状腺乳头状癌CGTHW3细胞侵袭能力，其机制可能为BRAFV600E突变基因表达下调增强甲状腺乳头状癌细胞粘附力所致。