灰盖拟鬼伞核定位蛋白重组表达系统的构建

摘要

为构建灰盖拟鬼伞Coprinopsis cinerea的核定位蛋白重组表达系统,本研究通过蛋白序列比对和信息学分析,预测了灰盖拟鬼伞组蛋白H2B的核定位序列,构建了融合组蛋白H2B核定位序列的绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)重组表达载体,将该载体转入灰盖拟鬼伞AmutBmut菌株,检测组蛋白H2B核定位序列是否可以引导GFP定位在细胞核区域。研究结果显示,在灰盖拟鬼伞β-微管蛋白启动子的驱动下,经过密码子优化的GFP基因可以在鬼伞体内表达、产生绿色荧光。同时来自灰盖拟鬼伞组蛋白H2Bb(CC1G_07639)的核定位序列,可以成功地引导GFP入核。本研究成功地构建了灰盖拟鬼伞核定位蛋白重组表达系统,为后续优化灰盖拟鬼伞的CRISPR/Cas9基因编辑系统、深入研究灰盖拟鬼伞的子实体发育机制奠定了基础。