一种灰盖鬼伞外切β-1,3葡聚糖酶基因的克隆与表达

摘要

为了简单快速地获取大量的β-1,3葡聚糖酶以研究其在真菌形态发生过程中所发挥的作用,本研究以灰盖鬼伞的cDNA为模板克隆了一种编码外切β-1,3葡聚糖酶的基因,并将该基因插入表达质粒pET28A(+)中,获得了重组表达质粒pET28A(+)-exg,转化到E coli Rosetta菌株中并进行异源重组表达.结果显示,克隆基因的cDNA全长2 415 bp,共编码786个氨基酸;SDS-PAGE电泳表明该基因在E.coli Rosetta菌株中得到了高效表达,重组表达的酶蛋白表观分子量为85 kDa;纯化后获得的表达酶经DNS法测得比活力为45 U/mg.酶学性质测定结果表明,该酶具有β-1,3葡聚糖外切酶活性,以昆布多糖为底物时,最适反应条件为pH 6.0、温度60℃,且有一定的耐热能力和较好的pH稳定性,具有较好的应用前景.