肝宁方含药血清对毒胡萝卜素诱导大鼠肝细胞内质网应激的影响

摘要

目的 研究肝宁方含药血清对毒胡萝卜素诱导的大鼠肝细胞BRL-3A内质网应激的影响及其相关机制.方法 将30只SD大鼠平分为3组,其中10只予肝宁方25 g/(kg·d)灌胃,另2组大鼠以等量生理盐水灌胃,均2次/d,连续灌胃10 d后取血离心,获得含肝宁方大鼠血清及正常大鼠血清.取大鼠肝细胞BRL-3 A细胞株,分为正常组、模型组、肝宁方组.正常组加入正常大鼠血清培养,模型组加入1μmol/L毒胡萝卜素及正常大鼠血清培养,肝宁方组加入1μmol/L毒胡萝卜素及含肝宁方大鼠血清培养.CCK8法检测BRL-3A细胞存活率,Fura-3/AM钙离子荧光探针测定BRL-3A细胞胞浆内Ca2+水平,谷草转氨酶(ALT)、谷丙转氨酶(AST)试剂盒检测BRL-3A细胞中ALT、AST水平;RT-PCR法检测BRL-3A细胞内质网应激相关基因GRP78、PERK、CHOP、Bcl-2 mRNA表达水平.结果 与正常组比较,模型组、肝宁方组BRL-3 A细胞存活率及Bcl-2 mRNA表达水平均明显降低(P均<0.05),细胞胞浆内Ca2+水平、细胞中ALT和AST水平及GRP78、PERK、CHOP mRNA表达水平均显著升高(P均<0.05);肝宁方组RL-3 A细胞存活率及Bcl-2 mRNA表达水平均显著高于模型组(P均<0.05),细胞胞浆内Ca2+水平、细胞中ALT和AST水平及GRP78 mRNA、PERK mRNA、CHOP mRNA表达水平均明显低于模型组(P均<0.05).结论 肝宁方可减弱内质网的Ca2+流失,抑制内质网应激相关的GRP78、PERK、CHOP mRNA表达,上调Bcl-2 mRNA表达,保护BRL-3A细胞并提高其存活率.