免疫磁珠分离-实时荧光PCR快速检测虾中沙门氏菌

摘要

建立了免疫磁珠分离(Immunomagnetic separation,IMS)联合实时荧光PCR(real time PCR)快速、灵敏地检测虾中沙门氏菌的方法.用纳米磁珠与抗沙门氏菌多克隆抗体制备免疫磁珠,优化反应条件,建立IMS方法.同时针对沙门氏菌ttr基因合成探针和引物,构建real time PCR体系,选4株代表性的沙门氏菌检测其特异性和灵敏度.结果显示,免疫磁珠的最适添加量为l00μL,免疫磁珠与样品菌液的最佳反应时间为30 min.建立的免疫磁珠分离-实时荧光PCR(IMS-real time PCR)方法特异性高,对于虾中沙门氏菌的检测限为鼠伤寒沙门氏菌5×101 CFU/25 g,猪霍乱沙门氏菌5×102 CFU/25 g,肠炎沙门氏菌和甲型副伤寒沙门氏菌l×l02CFU/25 g,检测全程可在6h内完成.对40份实际样品,IMS-real time PCR方法与国标法检测结果完全一致.建立的IMS-Real time PCR方法用时短、灵敏度高,为水产品中沙门氏菌的快速检测提供了技术支撑,对沙门氏菌引起的食源性疾病的预防和控制具有现实意义.