实时荧光PCR

摘要： 为建立一种布氏杆菌微滴数字PCR qPCR方法,对布氏杆菌病的定量诊断提供技术支持,在实时荧光PCR(qPCR)检测方法(T/CVMA 20—2020)的基础上,建立了布氏杆菌微滴数字PCR方法,并对方法的反应条件进行了优化,同时对其敏感性、特异性、重复性进行了评估。结果显示:本方法的最低检测下限为2.6 copies/μL,未发现与常见的5种细菌存在交叉反应,重复性检测的变异系数小于5%;采用该微滴数字PCR和实时荧光PCR检测方法分别对76份流产牛的阴道拭子进行检测,显示该微滴数字PCR比qPCR可以多检出3份阳性样品。本研究建立的微滴数字PCR方法敏感性高、特异性强、重复性好,适用于临床样品的布氏杆菌核酸检测。

摘要： 目的分析厦门地区女性高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染的情况、各亚型的分布以及跟年龄组的关系。方法采用实时荧光PCR法对2018年7月至2020年11月在我院妇科门诊就诊10761名女性患者的宫颈脱落细胞进行高危型HPV基因检测,分析受检者HPV亚型分布特点,单一、多重感染分布情况,以及不同年龄组间HPV感染情况。结果10761例患者中高危型HPV阳性1575例,检出率为14.64%。小于20岁年龄组检出率最高,达39.66%;其次是≥70岁年龄组,检出率为24.14%;21~29岁组与41~49岁年龄组检出率分别为17.16%和17.14%。高危型HPV感染从高到低依次为HPV混合型、52型、58型、16型、18型、33型。高危型HPV感染以单一感染为主,占总感染的33.26%,多重感染包括二重感染及二重以上的感染,占总感染人数的20.83%。结论采用实时荧光PCR技术检测女性高危型HPV感染快速准确,应重视厦门地区女性人群的高危型HPV筛查,尤其是HPV52、58、16这3种常见高危型的筛查,以有效降低宫颈癌的发生率。

摘要： 运用RT-PCR与变性高效液相色谱技术相结合,建立了对病毒性出血性败血症病毒快速检测方法,根据对VHSV病毒N基因保守序列的分析,设计一对特异性引物,将RT-PCR扩增产物经变性高效液相色谱进行快速检测。同时运用荧光RT-PCR方法进行平行检测。

摘要： 目的观察miR-21与程序性死亡因子4(PDCD4)在结肠癌组织中的表达情况并探讨二者关系。方法采用免疫组织化学检测78例结肠癌患者及癌旁组织中PDCD4蛋白表达情况;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测组织miR-21和PDCD4 mRNA的表达,并分析二者之间相关性;采用苏木素-伊红(HE)染色判定结肠病变程度及性质。收集患者临床数据信息并分析其与miR-21和PDCD4 mRNA表达之间的关系。结果免疫组织化学结果显示,70例(89.74%)结肠癌组织中PDCD4蛋白低表达或无表达。qRT-PCR显示,72例(92.31%)结肠癌组织中miR-21表达水平较癌旁组织高,68例(87.18%)PDCD4 mRNA表达水平较癌旁组织低。miR-21和PDCD4 mRNA表达在淋巴结是否转移中比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论miR-21高表达或PDCD4低表达可能与结肠癌发生有关。

摘要： 目的:分析不同品种枣样本的LOC112491224基因序列,设计枣源性成分的特异性引物和探针,为检测市售食品中枣源性成分提供一种分子生物学检测方法。方法:将提取好的DNA 10倍稀释至0.000 1 ng/μL,进行荧光PCR反应,确定其检测灵敏度。对苹果、梨、香蕉、草莓、葡萄、杏、樱桃和橘子等8种常见的非红枣植物样品进行特异性检测筛选,以验证引物探针的特异性,并检测市售样品。结果:该方法对枣源性成分的检测十分灵敏,灵敏度达到0.01 ng/μL,并且和常见的水果种类无交叉反应,表明特异性良好,同时也满足市场样品检测的实际需要。结论:本实验建立了一种可用于食品中枣源性成分实时荧光PCR检测方法,该方法为枣源性食品检验提供了新的检验方法和思路,具有很好的研究价值和应用前景。

摘要： 了解重庆地区销售禽畜血制品源性成分情况,为开展市场上禽畜血制品制假、售假、贩假风险评估提供数据支持。文中采用实时荧光PCR法对29份样品进行鸭、鸡和猪源性成分测定。其中8份鸭血中全部检测出鸭源性成分,4份检出鸡源性成分。21份血旺中,检出猪源性成分16份,检出鸭源性成分3份,检出鸡源性成分7份。

摘要： [目的]通过实时PCR(qRT-PCR)筛选海州常山叶片不同非生物胁迫条件下稳定的内参基因。[方法]利用已有的转录组数据,筛选出17个候选内参基因,在不同非生物胁迫(盐害、干旱和热害)下进行qRTPCR,通过利用GeNorm、NormFinder、BestKeeper及ReFinder软件分析筛选不同胁迫中最适的内参基因,选择CtNHX1基因,验证所筛选的内参基因的稳定性。[结果]RPL、AP-2盐害胁迫下最稳定,MDH、AP-2干旱胁迫下最稳定,UBCE2、ACT热害胁迫下最稳定;综合来看,非生物处理中,AP-2、UBCE2是最稳定的参考基因。[结论]AP-2、UBCE2可作为海州常山叶片非生物胁迫研究中基因定量使用的内参基因,为进一步开展海州常山分子机制研究、耐盐基因的开发利用奠定基础。

摘要： [目的]为完善我国转基因检测方法体系,建立转基因大豆MON87751品系特异性实时荧光聚合酶链式反应(real time polymerase chain reaction,PCR)检测方法。[方法]根据MON87751的3′端邻接区序列设计特异性引物和探针,建立MON87751品系特异性实时荧光PCR检测方法,并测定该方法的灵敏度、特异性及可重复性。[结果]灵敏度测试显示,其定量下限为40拷贝;重复性试验显示其相对标准偏差在可接受范围内。[结论]该研究建立的MON87751品系特异性实时荧光PCR检测方法特异性良好,灵敏度高,有良好的可重复性,适合对转基因大豆MON87751品系进行检测鉴定。

摘要： 随着人们生活水平的提高,对鹿产品的需求日益剧增。由于市场上优质鹿产品供不应求,许多不法分子借此鱼目混珠以次充好,导致掺假鹿及其衍生品泛滥,因此急需一种简单快速鉴别鹿产品真伪的方法。本研究对马鹿线粒体D-loop基因特异位点进行分析比对,并作为扩增靶序列,设计马鹿特异性的引物和探针,通过对特异性以及方法灵敏度测试,建立了马鹿的特异性实时荧光PCR方法。该方法具有很高的特异性及灵敏性,检测灵敏性为0.00174 ng/μL,适用于鉴别马鹿及其相关产品的真伪。

摘要： 饲料样本本身的复杂性给进出口产品转基因(genetically modified,GM)成分的检测工作带来了巨大的压力和挑战。玉米蛋白粉主要包含蛋白质、淀粉和脂类等成分,从中提取高品质的DNA比较困难,而高品质的DNA是转基因检测研究的关键,能够大大降低进出口检验中的“假阴性”结果。采用市售主流品牌常用的7种试剂盒(Promega公司、Biotecon公司、天根生化科技有限公司、Invitrogen公司、Qiagen公司、TaKaRa公司)、CTAB法以及改良SDS-CTAB法提取玉米蛋白粉中的DNA。通过对玉米内源基因进行实时荧光PCR检测,发现改良SDS-CTAB法提取的玉米蛋白粉DNA质量明显优于其他方法,改良SDS-CTAB法内源基因zSSⅡb的Ct值为28.14,较CTAB法提高了27%。研究建立的改良SDS-CTAB法在国内外尚属首次应用于饲料转基因产品中,并对7批次实验室送检样品进行转基因成分检测,成功检出2批次阳性样品。

摘要： 根据NCBI上已公布的中华鲟D-loop基因、细胞色素b基因、12S rRNA基因的核酸序列设计出四对引物对，经SYBR Green实时荧光PCR反应、熔解曲线分析和扩增片段克隆测序后，发现针对D-loop基因的F2-R1引物能够高效、特异地实现对靶序列扩增，选择其作为中华鲟基因特异性扩增引物，建立中华鲟基因SYBR Green实时荧光PCR检测方法。所建立的中华鲟D-loop基因SYBR Green实时荧光PCR检测方法特异性好、可操作性强，具有较好的应用价值，能够为我国中华鲟研究与保护提供较好的技术手段。

摘要： 根据NCBI上已公布的中华鲟D-loop基因、细胞色素b基因、12S rRNA基因的核酸序列设计出四对引物对，经SYBR Green实时荧光PCR反应、熔解曲线分析和扩增片段克隆测序后，发现针对D-loop基因的F2-R1引物能够高效、特异地实现对靶序列扩增，选择其作为中华鲟基因特异性扩增引物，建立中华鲟基因SYBR Green实时荧光PCR检测方法。所建立的中华鲟D-loop基因SYBR Green实时荧光PCR检测方法特异性好、可操作性强，具有较好的应用价值，能够为我国中华鲟研究与保护提供较好的技术手段。

摘要： 根据NCBI上已公布的中华鲟D-loop基因、细胞色素b基因、12S rRNA基因的核酸序列设计出四对引物对，经SYBR Green实时荧光PCR反应、熔解曲线分析和扩增片段克隆测序后，发现针对D-loop基因的F2-R1引物能够高效、特异地实现对靶序列扩增，选择其作为中华鲟基因特异性扩增引物，建立中华鲟基因SYBR Green实时荧光PCR检测方法。所建立的中华鲟D-loop基因SYBR Green实时荧光PCR检测方法特异性好、可操作性强，具有较好的应用价值，能够为我国中华鲟研究与保护提供较好的技术手段。

摘要： 根据NCBI上已公布的中华鲟D-loop基因、细胞色素b基因、12S rRNA基因的核酸序列设计出四对引物对，经SYBR Green实时荧光PCR反应、熔解曲线分析和扩增片段克隆测序后，发现针对D-loop基因的F2-R1引物能够高效、特异地实现对靶序列扩增，选择其作为中华鲟基因特异性扩增引物，建立中华鲟基因SYBR Green实时荧光PCR检测方法。所建立的中华鲟D-loop基因SYBR Green实时荧光PCR检测方法特异性好、可操作性强，具有较好的应用价值，能够为我国中华鲟研究与保护提供较好的技术手段。

摘要： 根据NCBI上已公布的中华鲟D-loop基因、细胞色素b基因、12S rRNA基因的核酸序列设计出四对引物对，经SYBR Green实时荧光PCR反应、熔解曲线分析和扩增片段克隆测序后，发现针对D-loop基因的F2-R1引物能够高效、特异地实现对靶序列扩增，选择其作为中华鲟基因特异性扩增引物，建立中华鲟基因SYBR Green实时荧光PCR检测方法。所建立的中华鲟D-loop基因SYBR Green实时荧光PCR检测方法特异性好、可操作性强，具有较好的应用价值，能够为我国中华鲟研究与保护提供较好的技术手段。

摘要： 本试验选择优化的CTAB法提取南京市售肉制品中大豆DNA，利用Real-timePCR建立Lectin和RRS基因的标准曲线，检测南京市售肉制品中转基因大豆成分的情况。结果表明，38个样品中有15种产品扩增出CaMV35S基因，7种扩增出NOS基因，8种产品扩增出RRS基因；两条标准曲线R2分别为0.9996和0.9992，根据曲线方程计算的肉制品中转基因成分百分比均小于0.9%。

摘要： 本试验选择优化的CTAB法提取南京市售肉制品中大豆DNA，利用Real-timePCR建立Lectin和RRS基因的标准曲线，检测南京市售肉制品中转基因大豆成分的情况。结果表明，38个样品中有15种产品扩增出CaMV35S基因，7种扩增出NOS基因，8种产品扩增出RRS基因；两条标准曲线R2分别为0.9996和0.9992，根据曲线方程计算的肉制品中转基因成分百分比均小于0.9%。

摘要： 本试验选择优化的CTAB法提取南京市售肉制品中大豆DNA，利用Real-timePCR建立Lectin和RRS基因的标准曲线，检测南京市售肉制品中转基因大豆成分的情况。结果表明，38个样品中有15种产品扩增出CaMV35S基因，7种扩增出NOS基因，8种产品扩增出RRS基因；两条标准曲线R2分别为0.9996和0.9992，根据曲线方程计算的肉制品中转基因成分百分比均小于0.9%。

摘要： 本试验选择优化的CTAB法提取南京市售肉制品中大豆DNA，利用Real-timePCR建立Lectin和RRS基因的标准曲线，检测南京市售肉制品中转基因大豆成分的情况。结果表明，38个样品中有15种产品扩增出CaMV35S基因，7种扩增出NOS基因，8种产品扩增出RRS基因；两条标准曲线R2分别为0.9996和0.9992，根据曲线方程计算的肉制品中转基因成分百分比均小于0.9%。

摘要： 本试验选择优化的CTAB法提取南京市售肉制品中大豆DNA，利用Real-timePCR建立Lectin和RRS基因的标准曲线，检测南京市售肉制品中转基因大豆成分的情况。结果表明，38个样品中有15种产品扩增出CaMV35S基因，7种扩增出NOS基因，8种产品扩增出RRS基因；两条标准曲线R2分别为0.9996和0.9992，根据曲线方程计算的肉制品中转基因成分百分比均小于0.9%。

摘要： 本发明公开了一种荧光检测光学系统、实时荧光定量PCR仪；属于分子诊断检测仪器领域；其技术要点：M通道组件包括：M个单通道组件；所述单通道组件包括：单色LED灯、准直透镜、激发光系统滤光片、聚焦透镜、发射光纤；所述N试剂孔检测组件包括：N个单试剂孔检测组件；所述每个单试剂孔检测组件包括：发射光纤、反应池、接收光纤组件、接收端滤光片组件、锥形导光棒、光电传感器；所述M通道组件的每个单通道组件的发射光纤均连接到塑料导光棒的第一端；N试剂孔检测组件的每个单试剂孔检测组件包括发射光纤均连接到塑料导光棒的第二端。本发明旨在提供一种荧光检测光学系统、实时荧光定量PCR仪，大幅提高检测效率。

摘要： 本发明涉及一步法实时荧光RT‑PCR反应缓冲液及其反应体系和PCR方法,该一步法实时荧光RT‑PCR反应缓冲液包括如下原料：三羟甲基氨基甲烷‑盐酸缓冲液、氯化钾、氯化镁、硫酸铵、二甲基亚砜、脱氧核糖核苷三磷酸、甘油、牛血清蛋白、吐温20、三氮化钠、Rox参比染料、去离子水。该一步法实时荧光RT‑PCR反应缓冲液增加了NH4+和N3‑，提高PCR反应效率，适用于PCR技术的高效扩增型和灵敏检测，其不仅具有稳定性好，荧光效果佳、灵敏度高的优点。该实时荧光PCR方法，通过采用一步法实时荧光RT‑PCR反应缓冲液配置成荧光RT‑PCR反应体系，其具有结果可靠和准确灵敏、操作简单、省时省力、降低检测成本，提高检查效率等优点。

摘要： 本发明公开了一种实时荧光PCR热循环装置及PCR仪，涉及生物实验仪器领域。实时荧光PCR热循环装置包括依次设置的隔板层、样品层和温控层；隔板层、样品层以及温控层形成闭环控制系统；隔板层以及温控层分别连接至样品层；温控层包括依次设置的均热层和供热层，供热层连接至均热层，均热层连接至样品层；均热层内部开设有真空腔体，真空腔体中设置有导热液。本发明提供的实时荧光PCR热循环装置及PCR仪通过导热液在均热层的真空腔体里吸收气化或者气相的导热液遇冷液化的往复循环以实现热传递，提高了整个加热面温度的均匀性，提高PCR反应的质量，提供更可靠的实验结果。

摘要： 本发明公开了一种荧光检测光学系统、实时荧光定量PCR仪；属于分子诊断检测仪器领域；其技术要点：M通道组件包括：M个单通道组件；所述单通道组件包括：单色LED灯、准直透镜、激发光系统滤光片、聚焦透镜、发射光纤；所述N试剂孔检测组件包括：N个单试剂孔检测组件；所述每个单试剂孔检测组件包括：发射光纤、反应池、接收光纤组件、接收端滤光片组件、锥形导光棒、光电传感器；所述M通道组件的每个单通道组件的发射光纤均连接到塑料导光棒的第一端；N试剂孔检测组件的每个单试剂孔检测组件包括发射光纤均连接到塑料导光棒的第二端。本发明旨在提供一种荧光检测光学系统、实时荧光定量PCR仪，大幅提高检测效率。

摘要： 本发明提供一种植物免提取直接实时荧光快速PCR扩增稳定剂、PCR扩增组合物和PCR扩增方法，具体公开了一种植物免提取PCR反应的稳定剂，所述稳定剂包括MgCl

摘要： 本发明涉及一步法实时荧光RT‑PCR反应缓冲液及其反应体系和PCR方法,该一步法实时荧光RT‑PCR反应缓冲液包括如下原料：三羟甲基氨基甲烷‑盐酸缓冲液、氯化钾、氯化镁、硫酸铵、二甲基亚砜、脱氧核糖核苷三磷酸、甘油、牛血清蛋白、吐温20、三氮化钠、Rox参比染料、去离子水。该一步法实时荧光RT‑PCR反应缓冲液增加了NH4

摘要： 本发明公开了一种实时荧光PCR热循环装置及PCR仪，涉及生物实验仪器领域。实时荧光PCR热循环装置包括依次设置的隔板层、样品层和温控层；隔板层、样品层以及温控层形成闭环控制系统；隔板层以及温控层分别连接至样品层；温控层包括依次设置的均热层和供热层，供热层连接至均热层，均热层连接至样品层；均热层内部开设有真空腔体，真空腔体中设置有导热液。本发明提供的实时荧光PCR热循环装置及PCR仪通过导热液在均热层的真空腔体里吸收气化或者气相的导热液遇冷液化的往复循环以实现热传递，提高了整个加热面温度的均匀性，提高PCR反应的质量，提供更可靠的实验结果。

摘要： 本发明实时荧光定量PCR的独立荧光通道检测系统属于生物检测技术领域，包括光学装置和受检装置，所述光学装置包括：光源和光电传感模组，光电传感模组包括：基板、光电传感元件、滤光膜，所述滤光膜被配置为对检测样本受光线激发的荧光进行至少两个波长的筛选；所述受检装置包括温块，所述温块上设有用以放置检测样本的沉孔；还包括光纤，所述光纤至少包括三个端口，分别用以对准所述光源、所述光电传感模组和所述检测样本。通过上述方案，实现了一种荧光通道可以同时检测不同的荧光物质的荧光，同时采用集成的荧光检测模块，减少物料数量，节省了加工和装配时间，维修也方便，成本更低，体积更小，提供了检测的精度和效率。

摘要： 本发明涉及检测系统的技术领域，公开了一种实时荧光定量PCR的荧光通道检测系统，包括：温控模组、反应池模组、通路模组、荧光检测模组、传动模组；本发明的通路模组中的通路光纤的一端与待检测样品光路连通，另一端分别与发射光纤和采集光纤连接设置，即荧光检测模组通过发射光纤和通路光纤向待检测样品发射激发光，激发光令目标病原体产生荧光，荧光将通过通路光纤和采集光纤进入荧光采集模组，从而实现对待检测样品中目标病原体的检测，发射光纤和采集光纤均与通路光纤连接设置，节省了放置光纤的空间，能够设置更多的光纤，能够同时与更多的待检测样品实现光路连通，即同时对更多的待检测样品进行检测，解决了现有技术中检测效率低的问题。

摘要： 本实用新型涉及一种荧光收集镜头及使用该荧光收集镜头的实时荧光定量PCR仪。该荧光收集镜头包括从物侧至像侧依次布设的第一透镜、第二透镜、第三透镜、第四透镜、第一滤光片、第五透镜、第六透镜、第七透镜及第八透镜；其中，第一透镜、第四透镜、第五透镜和第八透镜的光焦度为负值，第二透镜、第三透镜、第六透镜和第七透镜的光焦度为正值。本实用新型的荧光收集镜头通过8片透镜的组合，应用在实时荧光定量PCR仪上，实现了物方数值孔径较大，物面范围较大，且物方远心，有利于荧光收集，并且仅包括八片透镜，成本较低。