肠毒素大肠杆菌K88可视化快速检测方法的建立

摘要

本研究通过肠毒素大肠杆菌(E.coli)K88菌毛蛋白的适配体识别,结合纳米金标记和银增强信号放大技术,建立了一种快速、灵敏、特异的E.coli K88可视化快速检测方法.该检测方法是将能与E.coli K88特异性结合的生物素化的适配体1(aptamer 1),与目标菌E.coli K88以及纳米金-巯基化适配体2轭合物(aptamer 2-AuNPs)在一定条件下孵育,形成三明治式的aptamer 1-E.coliK88-aptamer 2-AuNPs复合物,随后通过生物素与亲和素的结合将复合物固定到修饰了链霉亲和素的微孔板上,最后运用银增强显色将反应信号放大.通过对检测方法条件的优化,本方法可特异、定量地检测E.coli K88,在1.0× 10～1.0× 105 cfu/孔目标菌范围内,其定量拟合线性曲线决定系数R2可达0.9903,且检测灵敏度达10 cfu/孔,而检测其它非目标菌株均为阴性.本方法为E.coli K88在临床样品中的可视化检测奠定了基础.