肠毒素性大肠杆菌F5菌毛LAMP检测方法的建立

摘要

本研究旨在建立肠毒素性大肠杆菌F5菌毛的环介导恒温扩增(LAMP)检测方法.针对编码F5菌毛基因保守区域设计并合成4条引物,以大肠杆菌(F5+)基因组DNA为模板,分别进行了反应温度和反应时间的优化试验、特异性试验、敏感性试验和模拟样品检测试验.结果显示,用所建立的LAMP方法,61℃水浴45min即可完成对阳性样品扩增,所得产物电泳后呈特征性梯状条带,阴性样品的扩增产物电泳后均无扩增条带.本方法对F5菌毛的最低检出量为72CFU/管,敏感性高于PCR方法(7.2×102CFU/管).LAMP和PCR对模拟样品检测结果的符合率为100％.该研究为肠毒素性大肠杆菌F5菌毛的快速检测提供了新的方法.