一株深海来源苏云金芽孢杆菌SWJS07所产蛋白酶的分离纯化及性质研究

摘要

利用超滤、硫酸铵盐析、DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换柱层析、Sephadex G-75分子筛柱层析对一株南海深海来源菌苏云金芽孢杆菌(B.thuringiensis)SWJS07所产蛋白酶进行分离纯化,纯化后经SDS-PAGE鉴定达到电泳纯,相对分子质量为37.0 kDa,酶的比活力提高了6.39倍,回收率为37.14％.研究其酶学性质表明,该蛋白酶最适催化温度为55℃,在30℃～45℃下稳定性较高,保温300 min残留酶活在80％以上;最适pH6.5,在pH 6.0～9.0蛋白酶稳定,4℃放置24h残留酶活在80％以上;2mMca2+、Mn2+对蛋白酶有不同程度的激活作用,而Hg2+、Cd2+、Al3+则强烈地抑制蛋白酶活;当在蛋白酶中添加2 mM Ca2+、Mn2+时,其最适催化温度分别为60℃和55℃,蛋白酶活分别提高了32.86％和28.35％,60℃保温30 min相对酶活基本保持不变,与纯酶(相对酶活残留21.02％)相比蛋白酶的热稳定性显著提高;EDTA-Na2可强烈抑制蛋白酶活,推测该蛋白酶属于金属蛋白酶.