盐藻番茄红素β-环化酶全长cDNA的克隆及结构分析

摘要

杜氏盐藻是迄今为止工业化最成功的藻类之一,主要特征是能累积大量的β-胡萝卜素,是β-胡萝卜素最好的天然资源.番茄红素β-环化酶是催化番茄红素合成β-胡萝卜素的关键酶.为阐明该酶在盐藻中合成β-胡萝卜素的作用和调控过程,本研究采用RT-PCR结合半巢式PCR方法,首先分离一段包含辅因子黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)结合位点的保守序列,再利用3'RACE、5'RACE方法结合降落PCR,获得盐藻番茄红素β-环化酶(LycB)cDNA的两个末端.完整的cDNA全长2475 bp,ORF长1824 bp,编码607个氨基酸,其编码蛋白的分子量为67 kD,等电点pI为8.45.经分析,盐藻番茄红素β-环化酶在系统进化上介于蓝藻和植物之间,但更靠近高等植物,故将此酶标记为LycB.