mRNA氧化损伤检测方法的优化及p53 mRNA氧化损伤分析

摘要

目的建立并优化检测真核细胞mRNA氧化损伤的方法——反转录阻断-双引物扩增法,检测p53 mRNA氧化损伤。方法建立非细胞体系和细胞体系mRNA氧化损伤模型,提取RNA并反转录成cDNA,根据所检测mRNA的5＇端和3＇端各设计一对引物,以cDNA为模板进行实时定量PCR。结果非细胞体系和细胞体系氧化处理组GAPDH和p53 mRNA的氧化损伤程度均明显高于对照组,且随着过氧化氢浓度增加RNA氧化损伤增强;同时一定限度内降低反转录酶用量能提高检测灵敏度。结论本研究建立并优化的RNA氧化损伤检测方法能检测特定mRNA对氧化的敏感性及损伤程度,为分析相关疾病造成的RNA氧化损伤以及探索其发病机制和治疗方法提供了技术支持。