H7N9流感病毒血凝素HA在毕赤酵母中的表达及免疫原性分析

摘要

目的利用毕赤酵母表达制备H7N9流感病毒血凝素[HA 1-525个氨基酸（aa）],并对其免疫原性进行研究。方法经全基因合成获得H7N9流感病毒[A/Hangzhou/1/2013（H7N9）]全长HA,以其为模板,PCR得到片段HA1-525,通过NspⅤ和NotⅠ双酶切连入pPICZαA载体,转入毕赤酵母X33,ELISA筛选阳性克隆。发酵培养后,表达上清经PEG20000沉淀获取HA1-525,并用糖苷内切酶H（endo H）酶切分析其N-糖链。将制备的HA1-525免疫BALB/c小鼠,经ELISA检测特异性HA7抗体滴度,红细胞凝集抑制实验分析血抑活性。结果培养上清用抗HA7抗体经ELISA检测,重组菌成功表达HA7,且Western印迹检测发现有特异性弥散条带,经endo H酶切后,HA1-525为均一条带,相对分子质量约58×103,与理论大小相当,表明HA1-525存在甘露糖基化结构。HA1-525两次免疫小鼠后可产生1∶36 000的抗体滴度。以H7N9裂解苗为抗原,检测其血抑活性为1∶700。结论利用毕赤酵母表达的H7N9流感病毒HA1-525可以诱导小鼠产生针对HA7的中和抗体。