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论文说明:缩略词
声明
第一章前言
一、禽流感
1. 禽流感的病原学基础
2. 禽流感病毒的分布与进化
3.H5N1的传播
4. 禽流感病毒的诊断
5. 高致病性禽流感病毒疫苗研发
6. 禽流感病毒治疗药物
二、巴斯德毕赤酵母(Pichia Pasoris)表达系统
1. Pichia pastoris表达系统的特点
2.Pichia pastoris的生物学特点
3. 菌株与表达载体
4. 外源基因与宿主染色体的整合
5. 外源蛋白分泌途径
6. 外源蛋白的糖基化
三、蛋白质结构预测
1. 蛋白质结构预测发展的必要性
2. 蛋白质结构研究的实验方法
3. 蛋白质结构研究的预测方法
4. 蛋白质结构预测的应用
四、蛋白质晶体学
1. 蛋白质晶体学的结晶原因与解析
2. 蛋白质结晶过程
3. 蛋白质晶体的培养方法
4. 蛋白质结晶的影响因素
五、本研究的目的和意义
第二章材料与方法
一、材料
1. 主要仪器设备
2. 菌株、质粒与酶
3. 主要试剂
4. 抗生素储备液的配置
5. 培养基的配置
6.DNA操作相关溶液
7. SDS-PAGE电泳相关试剂
8. Western-Blot试剂
9. ELISA试剂
10.其它试剂配制
二、方法
1.DNA相关实验方法
2. P.pastoris酵母相关实验
3. 重组酵母菌株的诱导表达
4. 发酵罐高密度培养
5. 蛋白质性质研究方法
6. 重组蛋白质的纯化
7. 结构模拟
8. 蛋白质晶体培养
第三章结果与分析
一、重组表达载体pPIC9K-HA1的构建与重组HA1蛋白的表达
1. 重组表达载体pPIC9K-HA1的构建与转化
2. 重组HA1蛋白的高效分泌表达研究
3. 重组HA1蛋白在摇瓶中诱导表达条件的优化
4. 发酵罐高密度发酵分泌表达rHA1
5. N-端缺失对rHA1分泌表达量的影响
6. 小结
二、重组HA1蛋白的纯化与性质研究
1. 重组HA1蛋白的纯化
2. 重组HA1蛋白的N-糖基化鉴定
3. MALDI-TOF-MS鉴定rHA1蛋白
4. 分析超离考察重组HA1蛋白在溶液中的状态
5. 小结
三、rHA1与rHA1-48aa的活性检测
1. rHA1与rHA1-48aa的抗原性检测
2. 重组HA1与HA1-48aa的免疫原性
3. 小结
四、HA1的表位分析
1. HA1上重要抗原位点的表位预测
2. Glu112,Lys113,Ile114定点突变对rHA1活性的影响
3. Pro118,Tyr137定点突变对rHA1生物活性的影响
4. Asn165定点突变对rHA1上13D4活性的影响
5. aa123~aa145 loop区突变后对rHA1活性的影响
6. 小结
五、13D4 Fab与rHA1复合物晶体的培养研究
1. 13D4Fab-rHA1复合物组分的确定
2. 13D4Fab-rHh1复合物晶体的培养
3. 小结
第四章讨论
一、 YU22 HA1与表达系统的选择
二、 重组HA1蛋白的有效表达与发酵放大研究
1. 摇瓶培养条件摸索
2. 分批补料高密度发酵条件摸索
三、 重组HA1蛋白的纯化与鉴定
四、rHA1和rHA1-48aa的活性检测
1. rHA1与rHA1-48aa的活性比较
2. rHA1成为疫苗的可能性
五、 HA1的表位研究
1. 蛋白质结构预测
2. 分子对接分析
3. 实验验证表位位点
六、13D4Fab与rHA1复合物晶体研究
总 结
展望
参考文献
致 谢
在校期间发表文章