抗基孔肯亚病毒人-鼠嵌合抗体真核表达载体的构建和表达

摘要

目的:表达具有中和活性的抗基孔肯亚病毒人-鼠嵌合抗体.方法:用RT-PCR法克隆具有中和活性的抗基孔肯亚病毒鼠源单克隆抗体CHIK-IF1的轻重链可变区基因,克隆人IgG1恒定区基因组基因,构建了轻重链嵌合基因和表达质粒pCdhfr1L,pcDNA3.1H,共转染二氢叶酸还原酶缺陷型CHO细胞,用ELISA检测培养上清中嵌合抗体的表达,MTX加压筛选表达量高的克隆,扩大培养收集上清并纯化,纯化的嵌合抗体进行SDS-PAGE、Western 印迹检测和抗原结合活性的检测.结果与结论:在CHO细胞中成功表达了抗基孔肯亚病毒的嵌合抗体,为制备抗基孔肯亚病的被动免疫制剂奠定了良好的基础.