SNAP-25基因克隆及其在大肠杆菌中的表达与鉴定

摘要

目的:构建SNAP-25基因的原核表达载体pET22b-SNAP-25,对表达产物活性进行初步鉴定.方法:根据GenBank中已报道的SNAP-25基因序列,设计特异引物,通过RT-PCR从小鼠全脑组织总RNA中得到基因.将全长基因克隆至原核表达载体pET22b中,重组质粒转化大肠杆菌E. coli B121感受态细胞,IPTG诱导表达,表达产物经Ni-NTA亲和层析进行纯化.通过SDS-PAGE和免疫印迹对其进行鉴定,并对该蛋白进行活性的初步分析.结果与结论:成功构建了原核表达载体pET22b-SNAP-25,Western印迹证实重组蛋白获得表达.表达的重组蛋白与A型肉毒毒素混合反应,经SDS-PAGE验证,重组蛋白具有被毒素特异性切割的活性.