沙门菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的多重PCR检测

摘要

根据沙门菌invA基因、大肠杆菌phoA基因和金黄色葡萄球菌nuc基因序列,设计3对特异性引物进行多重PCR并对反应条件进行优化.结果表明3对引物能特异地扩增出284bp、622bp、484bp的目的条带;最佳反应条件为沙门菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的引物浓度分别为40nmol/L、40nmol/L、80nmol/L,Mg2+浓度2.4mmol/L,dNTP浓度200μmol/L,Taq DNA聚合酶1.5U,退火温度55.0℃～57.4℃之间;在此条件下多重PCR同时检测DNA的敏感性分别是10.2pg、10.2pg、102.0pg,检测时间4h.建立的多重PCR是一种敏感、特异、准确、快速的方法,为同时检测食品中沙门菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌奠定了基础.