雷公藤多苷对rmMIF诱导大鼠成纤维样滑膜细胞增殖及RANKL／OPG表达的影响

摘要

目的观察雷公藤多苷（tripterygiumglycoside，TG）对重组鼠巨噬细胞移动抑制因子（recombinantmousemacrophagemigrationinhibitoryfactor，rmMIF）诱导大鼠成纤维样滑膜细胞（fibroblast—likesynoviocytes，FLS）的增殖及其细胞核因子-KB受体活化因子配体（receptoractivatorofnuclearfactorkappaBligand，RANKL）、骨保护素（osteo—protegerin，OPG）表达的干预作用。方法采用大鼠FLS细胞株RSC-364，常规方法复苏、培养、传代，实验用3～5代FLS。分为4组：空白对照组加入200μlDMEM培养液，另3组分别加入200肛1含rmMIF（200ng／m1）（MIF组）、rm—MIF（200ng／m1）＋TG（20μg／m1）（MIF＋TG组）、rmMIF（200ng／m1）＋MTX（0．5μg／m1）（MIF＋MTX组）的DMEM培养液。置37℃、5％CO2孵箱培养48h。MTT法检测FLS的增殖活性；免疫组化法检测滑膜细胞OPG／RANKL的表达；酶联免疫吸附试验（ELISA）检测FLS上清液OPG、RANKL表达。结果MIF组增殖活性高于空白对照组，MIF＋TG组、MIF＋MTX组增殖活性低于空白对照组和MIF组（P〈0．01）。MIF＋TG组和MIF＋MTX组细胞OPG标记指数均高于空白对照组和MIF组，MIF＋TG组OPG标记指数高于MIF＋MTX组（P〈0．01，P〈0．05）。MIF组细胞RANKL标记指数高于空白对照组，MIF＋TG组、MIF＋MTX组RANKL标记指数均低于MIF组（P〈0．05，P〈0．01）。MIF组上清液RANKL浓度和RANKL／OPG值均高于空白对照组，MIF＋MTX组上清液RANKL浓度低于空白对照组（P〈0．05，P〈0．01）；MIF＋TG组和MIF＋MTX组上清液RANKL浓度和RANKL／OPG值均低于MIF组（P〈0．01）。结论rmMIF可促进体外培养大鼠FLS增殖，上调FLS的RANKL表达和RANKL／OPG值；TG抑制rmMIF诱导的大鼠FLS增殖、降低rmMIF诱导大鼠FLS分泌RANKL、下调FLS的RANKL表达和RANKL／OPG比值，可能是其治疗类风湿关节炎的骨免疫学机制之一。