雷公藤多苷对rmMIF诱导大鼠成纤维样滑膜细胞增殖及RANKL/OPG表达的影响

摘要

目的观察雷公藤多苷(tripterygium glycoside,TG)对重组鼠巨噬细胞移动抑制因子(recombinantmouse macrophage migration inhibitory factor,rmMIF)诱导大鼠成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)的增殖及其细胞核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor kappaB ligand,RANKL)、骨保护素(osteo-protegerin,OPG)表达的干预作用。方法采用大鼠FLS细胞株RSC-364,常规方法复苏、培养、传代,实验用3～5代FLS。分为4组:空白对照组加入200μl DMEM培养液,另3组分别加入200μl含rmMIF(200 ng/ml)(MIF组)、rm-MIF(200 ng/ml)+TG(20μg/ml)(MIF+TG组)、rmMIF(200ng/ml)+MTX(0.5μg/ml)(MIF+MTX组)的DMEM培养液。置37℃、5%CO2孵箱培养48 h。MTT法检测FLS的增殖活性;免疫组化法检测滑膜细胞OPG/RANKL的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测FLS上清液OPG、RANKL表达。结果 MIF组增殖活性高于空白对照组,MIF+TG组、MIF+MTX组增殖活性低于空白对照组和MIF组(P<0.01)。MIF+TG组和MIF+MTX组细胞OPG标记指数均高于空白对照组和MIF组,MIF+TG组OPG标记指数高于MIF+MTX组(P<0.01,P<0.05)。MIF组细胞RANKL标记指数高于空白对照组,MIF+TG组、MIF+MTX组RANKL标记指数均低于MIF组(P<0.05,P<0.01)。MIF组上清液RANKL浓度和RANKL/OPG值均高于空白对照组,MIF+MTX组上清液RANKL浓度低于空白对照组(P<0.05,P<0.01);MIF+TG组和MIF+MTX组上清液RANKL浓度和RANKL/OPG值均低于MIF组(P<0.01)。结论 rmMIF可促进体外培养大鼠FLS增殖,上调FLS的RANKL表达和RANKL/OPG值;TG抑制rmMIF诱导的大鼠FLS增殖、降低rmMIF诱导大鼠FLS分泌RANKL、下调FLS的RANKL表达和RANKL/OPG比值,可能是其治疗类风湿关节炎的骨免疫学机制之一。