miR-6216对缺氧/复氧H9C2心肌细胞损伤的影响

摘要

目的 探讨miR-6216对缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞损伤的影响.方法 体外培养大鼠胚胎心肌细胞H9C2,构建H/R(2 h/4 h)模型.实时荧光定量PCR (qRT-PCR)检测miR-6216的表达水平;细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞存活;平板形成实验检测细胞克隆形成能力;试剂盒检测细胞内丙二醛(MDA)含量和细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的活性;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印记(Western blot)检测细胞周期蛋白D1 (Cyclin D1)、P21、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达水平.将miR-6216抑制物(anti-miR-6216)、miR-6216模拟物(miR-6216 mimics)分别转染H9C2,将缺氧/复氧处理后,采用上述方法检测以上指标变化.结果 缺氧/复氧诱导后H9C2细胞miR-6216的表达水平显著升高,细胞存活率和克隆能力显著降低,MDA含量和LDH活性显著升高,Cyclin D1和Bcl-2的表达显著降低,P21和Bax的表达水平显著升高,细胞凋亡率显著升高(P＜0.05).抑制miR-6216可显著提高H9C2细胞存活率和克隆形成能力,降低MDA含量和LDH活性,促进Cyclin D1和Bcl-2的表达,抑制P21和Bax的表达,抑制缺氧复氧诱导的细胞凋亡(P＜0.05).过表达miR-6216可显著抑制细胞存活和克隆形成能力,升高MDA含量和LDH活性,抑制Cyclin D1和Bcl-2的表达,促进P21和Bax的表达,加剧缺氧复氧诱导的细胞凋亡(P＜0.05).结论 miR-6216在缺氧/复氧诱导的心肌细胞中表达上调,抑制miR-6216表达可减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤.